細胞分裂素對離體子葉的保綠效應實驗

更新時間：2018-12-03

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一、目的

使用恒溫培養箱、恒溫水浴鍋、了解細胞分裂素對離體子葉的保綠作用及基本原理和方法。

二、原理細胞分裂素可阻礙核酸水解酶和蛋白水解酶的產生，因此能延緩器官衰老，使離體葉片保綠，保綠作用的強弱可通過測定葉綠素含量的變化來衡量，也可由葉色變黃枯死的時間來衡量。

三、材料、儀器設備及試劑

1. 材料：黃瓜子葉；蘿卜子葉。

2. 儀器設備：電子分析天平；分光光度計；恒溫培養箱；恒溫水浴鍋；25ml容量瓶；25ml刻度試管；試管架；移液管；黃瓜子葉的培養皿（直徑5cm）；瓷盤；刀片；尖頭鑷子；濾紙；吸耳球等。

3. 試劑及配制：100μg·ml－16－BA溶液；95﹪乙醇；CaCO3粉末。 100μg·ml－16－BA母液配制：準確稱取6－BA 10mg, 加幾滴1mol·L－1HC1溶解（可稍加熱溶解），然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100ml。

四、實驗步驟

1. 黃瓜幼苗的培養精選黃瓜種子，播入墊有濾紙的瓷盤中，加蒸餾水使之濕潤（注意種子不能漬水），待種子萌發后，在光下培養2～3d左右，直至子葉綠化。備用。

2. 系列濃度6－BA溶液配制：吸取100μg·ml－16－BA母液，稀釋成10、5、0.5 μg·ml－1的系列濃度溶液。

3. 離體黃瓜子葉的培養

（1）取4套培養皿，編號，每套培養皿各墊一張濾紙，分別作0.5、5、10μg·ml－1的6－BA溶液和蒸餾水(CK)4個處理，即為組。

（2）選取子葉大小、生長一致的黃瓜幼苗20株，每處理5 株（10片子葉），用刀片切下不附帶葉柄的子葉，分別稱取鮮重，將數據記入下表中。然后將子葉放入組相應編號的培養皿中，分別加入不同濃度的6－BA溶液3ml, 對照（CK）加蒸餾水3ml。蓋上培養皿蓋，置于暗處，溫度25－28℃培養3 d 。另取與組相同的黃瓜幼苗20株，用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組，直接用來測定葉綠素含量。

4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測定

（1）葉綠素的提取取3支25ml刻度試管，編號。稱取第二組的黃瓜子葉三份（3個重復），每份10片子葉，然后放入相應編號的刻度試管中，各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3－4ml，用玻棒小心將子葉搗碎后，將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右，直到子葉碎片無色為止，用濾紙過濾于25ml容量瓶中（如殘渣仍帶綠色，可再加幾ml乙醇繼續提取，直至殘渣無綠色）。濾紙上的色素用乙醇慢慢點滴清洗入容量瓶中，后定容至刻度，搖勻，待測。

（2）葉綠素含量的測定在652nm波長處，以95﹪乙醇為空白對照，測定葉綠素提取液的吸光度（A值）。并按公式計算出葉綠素含量。即為培養前子葉的原始葉綠素含量。

5. 組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測定組黃瓜子葉在暗處培養3d后，按上述第（4）步驟方法分別測定各處理子葉葉綠素含量，并按公式計算出各處理葉綠素含量，即為暗培養后子葉葉綠素含量。

五、結果計算葉綠素含量計算公式：

D652 × 提取液總量（ml）葉綠素含量（mg·g－1Fw）= —————————————— 34.5 × 樣品鮮重（g）公式中：D652 — 在652nm波長下測定的吸光度值 34.5— 葉綠素a、b在652nm波長處的比吸收系數培養后葉綠素含量暗培養后葉綠素含量占培養前葉綠素含量（﹪）= —————————×100 培養前葉綠素含量

六、恒溫培養箱、恒溫水浴鍋、詳情可咨詢喆圖小編。

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