用37℃培養(yǎng)箱制備感受態(tài)

更新時間：2019-03-26

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今天喆圖小編來說說在實驗中，為了獲得純的重組質(zhì)粒DNA，需要允許外源DNA分子進入的細胞。經(jīng)過一些特殊方法處理后，細胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的細胞，即感受態(tài)細胞。

那么感受態(tài)如何制備，喆圖小編就來給大家說一說它的基本制備步驟：

①、從37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-20 h的平板中挑取一個單菌落(直徑2-3 mm)，轉(zhuǎn)到一個含有100 ml LB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37℃劇烈振搖培養(yǎng)3 h。一般經(jīng)驗，1 OD600約含有大腸桿菌DH5α 109 個/mL。

②、將細菌轉(zhuǎn)移到一個無菌、一次性使用的、用冰預冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培養(yǎng)物冷卻至0℃。

③、于4℃用Sorvall GS3特頭以4 100 r/min離心10 min，以回收細胞。

④、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養(yǎng)液流盡。

⑤、每50 ml初始培養(yǎng)液用30 ml預冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重懸每份細胞沉淀。

⑥、于4℃用Sorvall GS3轉(zhuǎn)頭以41 00 r/min離心10 min，以回收細胞。

⑦、倒出培養(yǎng)液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養(yǎng)液流盡。

⑧、每50 ml初始培養(yǎng)物用2 ml用冰預冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重懸每份細胞沉淀。

⑨、此時可以用新鮮制備的感受態(tài)細胞直接做轉(zhuǎn)化實驗，也可以將細胞凍存于- 40℃的低溫保存箱中。

以上內(nèi)容僅供參考如需了解詳情請聯(lián)系喆圖客服。

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