用恒溫培養箱培養初代細胞

更新時間：2019-04-15

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     今天喆圖小編給大家講講初代培養或原代培養，是從供體獲取組織后的培養。其蕞大優點是：組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩定的情況下，在一定程度上能反映體內狀態。
     合成培養基胰蛋白酶消化培養法，能把組織塊分散成細胞團或單個細胞，便于細胞從培養液中攝取營養和排出代謝產物，細胞能較快地長成單層。本法尤適用于培養大量組織，細胞產量高；但用于經常性小量培養工作稍顯繁瑣，無菌操作不良時且易污染。
     首先講講實驗方法：

     實驗材料：試劑、試劑盒 Hanks、培養液、胰蛋白酶
     實驗所需儀器、耗材：恒溫水浴鍋、吸管、平皿、培養瓶、恒溫培養箱、燒杯、攪拌器、三角燒瓶、不銹鋼篩、眼科剪、眼科鑷、計數板、CO2培養箱等等。
      實驗步驟：
     1. 準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20 分鐘；
     2. 布局：點燃煤氣燈，安裝吸管帽（應通過火焰）；

     3. 處理組織：把組織塊置入燒杯中，用Hanks液漂洗2~3 次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘；
     4. 剪切：用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊（用手術刀割亦可），以便于消化；加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞；
     5. 消化：或用恒溫水浴鍋，或置入37 ℃恒溫培養箱中消化均可，消化中每隔20 分鐘應搖動一次；消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定；
     6. 分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊；低速離心消化液5 分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液；
     7. 計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中；對大多數細胞來說，pH 要求在7.2~7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說膽液體變酸，可用NaHCO3調整；
     8. 培養：置入36.5 ℃恒溫培養箱中培養；如果用CO2培養箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需更換新塞。
注意事項：
     9. 組織塊、胰蛋白酶、培養液等易受紫外線傷害的物品，*在培養時再攜入操作野；如預先置入，需用紙張覆蓋，以免受射線影響；開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

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