抗氨芐青霉素大腸桿菌的分離、培養(yǎng)及計(jì)數(shù)

更新時(shí)間：2018-09-18

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接下來(lái)喆圖小編就來(lái)說(shuō)說(shuō)抗氨芐青霉素大腸桿菌如何進(jìn)行分離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)及實(shí)驗(yàn)所需材料和藥品：

待分離的大腸桿菌菌液、高壓蒸汽滅菌鍋、LB固體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基、接種環(huán)、玻璃三角刮刀、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、超凈工作臺(tái)、酒精燈、9ml無(wú)菌水、移液槍

1、實(shí)驗(yàn)需要制備并使用選擇培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選效率。

2、分離單克隆菌落采用平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，即菌落。

3、使用LB液體培養(yǎng)基并放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單克隆菌落以達(dá)到擴(kuò)大培養(yǎng)的目的。

4、稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液（10^5,10^6,10^7）分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

5、用無(wú)菌水稀釋菌液：取一毫升液體培養(yǎng)基基液加入一瓶含有9ml 的無(wú)菌水中，放入恒溫振蕩器中震蕩使液體充分?jǐn)U散。取震蕩后溶液中的1ml液體加入另一瓶無(wú)菌水中，震蕩，重復(fù)此步操作，進(jìn)行梯度稀釋，每一步濃度稀釋到之前的十分之一。

6、計(jì)數(shù)時(shí)，選擇未污染的培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。使用記號(hào)筆在培養(yǎng)基表面標(biāo)記，并使用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)菌落個(gè)數(shù)。

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